【摘要】该研究成果于2022年6月作为重庆市地方标准发布，填补重庆地区该病核酸检测技术空白。
山羊地方性鼻腺瘤（ENA）是由山羊地方性鼻内肿瘤病毒（ENTV-2）引起的一种慢性、进行性、接触性的动物传染病。因该病初期症状不易观察，且目前尚无可用的疫苗和治疗药物，导致ENA的早期诊断和综合防控困难。2015年以来，我们在重庆市酉阳县多个羊场发现该病例后，此病开始流行并产生危害。
为此，草业研究所项目组进行临床样品采集，根据ENTV-2保守区设计特异性的引物，经过病毒RNA提取和反转录，合适染料的选择，引物浓度优化，PCR反应条件和荧光定量PCR（qPCR）反应条件优化等一系列实验室研究，并对比SYBR Green I和常规PCR两种方法，对其特异性、灵敏度、重现性进行了测定。结果表明EvaGreen qPCR对检测ENTV-2具有很好的重复性、特异性和敏感性，可用作ENTV-2核酸检测，是一种有效诊断山羊ENA的临床工具，为山羊ENA的防控打好了基础。
该研究成果“ENTV-2 EvaGreen荧光定量PCR检测方法”相关文章于2019年2月发表在《Molecular and Cellular Probes》杂志，并于2022年6月作为重庆市地方标准发布，填补重庆地区该病核酸检测技术空白。
图1 qPCR引物的设计
图2EvaGreen qPCR的扩增曲线
图3 EvaGreen qPCR的标准曲线
图4 EvaGreen qPCR的熔解曲线